用生物指示剂的方法来研究臭氧消毒的效果 摘要:目的：建立有效的臭氧消毒检测方法。方法：用生物指示剂的方法来研究臭氧消毒的效果，从而建立臭氧消毒的检测手段。结果：生物指 示剂能够对臭氧消毒的效果进行检测，而且方法简便，成本低。结论：用生物指示剂完够对臭氧的消毒效果进行检测。

关键词：生物指示剂;臭氧;消毒

臭氧在常温、常压下分子结构不稳定，很 快自行分解成氧气（O2）和单个氧原子（O）；后 者具有很强的活性，对细菌有*的氧化作用， 将其杀死，多余的氧原子则会自行重新结合成 为普通氧原子（O2），不存在任何有毒残留物，故 称无污染消毒剂，它不但对各种细菌（包括肝炎 病毒，大肠杆菌，绿浓杆菌及杂菌等）有*的 杀灭能力，而且对杀死霉素也很有效。

在洁净区中，一般在药品生产前通入臭氧 1小时进行消毒，但是消毒效果如何，却很少检 查，尤其缺乏经常性的检测。为此，应用了生物 指示剂和消毒实验等方法进行了对臭氧消毒效 果的验证，并论证了生物指示剂的实用价值。

1材料与方法

1.1实验对象

哈药集团制药总厂10个洁净区。在验证 臭氧消毒效果前，分别测量各个无菌室的房间 体积和空调净化系统的风管体积。房间体积包 括所有需要送风保护的房间，风管体积包括空 调机组的体积、主风管的体积和各个支管的体 积。风管体积消耗了大量的臭氧，所以必须将此 部门体积计入测量体积。同时测量洁净区的温 湿度和清洁情况，因为房间的温湿度必须作为 日常臭氧消毒的控制指标，这是我国药品生产 质量管理规范的要求，房间的清洁情况主要是 指与正常的清洁情况做对比，清洁程度要比正 常的清洁程度差，这样才能证明在zui差的条件 下进行的消毒*达到效果后，正常清洁就会 *洁净室的清洁要求。

用生物指示剂的方法来研究臭氧消毒的效果 1.2臭氧发生器消毒的计算

以选择合适的臭氧发生器为前提，我们的 臭氧发生器都将依据这个标准进行选型，选择 合适的臭氧发生器后，再进行臭氧消毒实验。设 洁净区房间体积为V1，空调净化系统风管体积 为V2，V3为保持洁净区正压所补充的新风的 臭氧消耗量。

则消毒空间体积为：V=V1+V2+V3 试中V3的确定很据消毒实践，归纳出较 为可靠的经验公式如下：

V3=空调净化系统循环总风量×25%（假 定新风补充量为25%）×10%（保持洁净区正压 需补充的新风量）×37.75%（计算应用臭氧半 衰期的预算值）

即：V3≈循环系统总风量×0.944%

1.3臭氧发生器的选择

依据有关文献，臭氧消毒的浓度（C）要求 达到10×10-6，折算为19.63mg/m3；臭氧1h的 衰退率（S）为62.25%，则臭氧发 生器的臭氧发生量的计算公式 就是：W（mg/h）=CV/（1-S）。

1.4臭氧消毒效果实验

1.4.1生物指示剂的制作：

以金黄色葡萄球菌ATCC6538， 大肠杆菌ATCC25923，枯草杆菌 黑色变种9372，白色念球菌 10231，取1ml稀释液涂于 37.5px×12.5px盖玻片上，每片含 菌量为106个，置于无菌平皿 内，备用。

1.4.2生物指示剂的放置数

量根据下表进行，此表的来源是 我国药品生产质量管理规范的 附录标准，当然，放置的位置要 求在洁净空气循环zui差的位置， 这样才能有代表性。

以空气不易到达的位置为 原则放置生物指示剂。

1.4.3臭氧消毒实验：按照 臭氧消毒流程打开空调送风系 统，当房间温湿度指标*达到 标准后，开启臭氧发生器。当臭 氧发生器预热完成后，向洁净区 通入计算后的臭氧量，然后停止 送入臭氧，空调系统进行内循环程序。循环60 分钟后，结束消毒程序，将洁净区的生物指示剂 做好标记，取出，在净化工作台上将生物指示剂 放入到琼脂培养基中培养7天，然后观察每个 生物指示剂的细菌生长情况。标准是每片生物 指示剂经过培养后，细菌数小于103。

2结果

从表2可见，臭氧消毒后，对生物指示剂 的含菌数进行检测，结果含菌数均为<103，符合 通用的消毒效果标准。

3讨论

3.1我们通过生物指示剂的方法对10个 洁净区的臭氧消毒效果进行了研究，结果证明， 生物指示剂完够反映臭氧消毒效果，臭氧 消毒方法的可靠性也通过生物指示剂得到了证 实。

3.2我们的研究为药品生产企业找到了一 个理想的臭氧消毒的检测办法。它的成本低，操作方便。本次我们使用的生物指示剂是人工自行配制，也可以购买杭州百达悦晟科技有限公司的含菌数106的标准生物指示剂，在进行臭氧消毒效果验证时会更加便捷。